技术革新 提质增效 | 一个流动相条件完成蛋白，mRNA和AAV的聚体分析

 

SurePac Bio 550 SEC MDI革新技术

 

1 Monodisperse（单分散颗粒）：

均一的3µm单分散硅胶颗粒技术，优异的孔径分布，降低了色谱分离中扩散效应的影响。

 

2 Inert technology（惰性技术）：

先进的填料包裹技术，屏蔽了离子交换位点，最小化非特异性结合，生物惰性的硬件，在降低了非特异性结合的同时能够兼容MS，CAD，MALS等检测器。

 

3 High-Reproducitivity（高重现）

精准控制色谱柱填料的装填，更高的质控放行标准，在保证高柱效的同时，实现了优异的批间一致性。

 

4 High-Throughout（高通量）

4.6mm X 150mm的柱子同时兼容HPLC和UHPLC系统，可以实现7分钟完成一个样品的分析。

 

 

 

技术革新-蛋白分析不同流动相条件结果对比

不同盐浓度下蛋白分离对比图

 

 

不同比例有机溶剂下蛋白对比谱图

 

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先进的填料包裹技术，屏蔽了离子交换位点，最小化非特异性结合，生物惰性的不锈钢SurePac Bio 550 SEC MDI色谱柱，降低了蛋白与色谱柱的非特异性结合，如图（1）所示在pH6.8条件下，改变盐浓度对500kDa 蛋白分离的影响。高浓度的氯化钠稍能提升聚体与单体的分离度，缓冲液浓度在20-50 mmol/L之间，聚体与主峰的分离度差别不大。如图（2）所示在50 mmol/LNaH2PO4+300 mmol/L NaCl（pH6.8）体系中，比较加入0-15%不同比例乙腈对蛋白样品分离的影响，本实验中发现色谱柱与该样品基本没有疏水性吸附，在不加乙腈的体系中聚体和主峰的分离度以及聚体的峰高峰谷比最优。实验结果说明SurePac Bio550 SEC MDi色谱柱与该蛋白之间的离子性吸附和疏水性吸附非常低，在不加乙腈的体系中就可以将聚体和蛋白分离地比较好。

50 mmol/LNaH2PO4+300 mmol/L NaCl（pH6.8）条件下分析mRNA的结果

 

 

50 mmol/LNaH2PO4+300 mmol/L NaCl（pH6.8）条件下荧光检测器下分析AAV的结果

 

 

50 mmol/LNaH2PO4+300 mmol/L NaCl（pH6.8）条件下UV检测器下分析AAV的结果

 

 

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如图（2）（3）（4）（5）所示，SurePac Bio 550 SEC MDi 色谱柱在15分钟内实现了500 kDa 蛋白，mRNA和AAV9单体和聚体的较好分离。样品与色谱柱之间的离子性吸附和疏水性吸附都比较低，在一个相同的色谱流动相体系中，同时完成三类样品的聚体和单体分析。生物兼容Vanquish Flex液相系统下，该色谱柱分离不同滴度的AAV9，紫外检测器和荧光检测器下都未观察到残留。

 

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